實驗名稱：超聲激活血卟啉對S180腫瘤細胞表面EGFR表達量的影響

　　研究方向：生物醫療

　　測試目的：

血卟啉是從血紅蛋白中提取的有機光敏劑，其本身無抗腫瘤效應，但它可以在動物和人的多種腫瘤組織優先聚集，易爲聲光輻射處理激活，當它被聲光激活後能産生強烈的抗腫瘤效應。美國利用光激活治療腫瘤，這種方法被稱爲光動力學療法，簡稱PDT。光動力學療法在臨床主要應用于人體表面淺層腫瘤的治療。光在生物組織中的穿透能力差，使其對深部腫瘤的治療受到限制。超聲聯合血卟啉對小鼠移植腫瘤生長抑制有協同效應，發現單用血卟啉無抑制作用，單用超聲僅有輕微抑制作用，而兩者聯合則有明顯的抑制效果，並將之命名爲聲動力學療法。超聲是一種彈性機械波，其在生物組織中的穿透能力比激光強，同時超聲能夠聚焦于特定部位。聲動力療法對于治療腫瘤細胞有較強的針對性，對正常組織無創傷，組織穿透力強，並且機體不産生耐受性，可以反複多次治療，因而它對于治療腫瘤，特別是組織深層腫瘤有著較好的應用前景。有學者認爲SDT殺死或抑制腫瘤細胞的部分機理是通過超聲的熱效應來實現的，但是大量的實驗結果提示，SDT可能更主要地與超聲激活聚集在癌組織的血卟啉産生單線態氧有關。

　　測試設備：ATA-8202射頻功率放大器、昆明系小白鼠、艾氏腹水腫瘤細胞系、超聲探頭、血卟啉衍生物爲單羟乙基單乙烯基次卟啉、細胞色素c和Bax單克隆抗體、caspase-3單克隆抗體、鏈黴卵白素SP試劑盒。

　　實驗過程：

　　接種：S180腹水瘤細胞于6只小鼠腹腔1周後，隨機取3只小鼠，抽取腹水細胞，分別置于醫用薄壁試管，加入RPMI1640+10%小牛血清培養基中，于37℃孵箱培養，實驗時用生理鹽水調整細胞濃度至2x10⁶個/ml。每只小鼠抽取的腹水細胞分爲12管，分爲四組，分別爲對照組(CT)、血卟啉組(H)、超声組(U)和超声加血卟啉組(UH)，每組三管，每管0.5ml细胞悬液。H組和UH組每管中加入血卟啉4ul，使其終濃度爲0.01mg/ml，37℃CO₂孵箱孵育，45min后U組和UH組分别在频率为1.8MHz，強度爲2W/cm²的超聲裝置中聲照處理3min，各实验組分别于声照后1h、3h、5h取材，常規細胞塗片。

　　免疫組织化学染色：以SP法进行免疫組织化学染色：細胞塗片固定後加3%過氧化氫處理15min，除去內源性酶PBS洗3次，加正常動物血清30min以減少非特異性染色，加EGFR一抗4℃過夜，PBS代替一抗作爲陰性對照。SP染色按試劑盒說明進行，DAB顯色，梯度酒精脫水，中性樹膠封固蓋片。

　　陽性結果觀察：各組随机选取10個高倍视野，利用数码显微成像系统进行图像采集和分析。Image Pro-Plus5.0图像分析软件测定各組照片的平均光密度OD值(0~255)(用平均光密度表示阳性细胞表达强度，平均光密度值越大则表达越强)。組间t檢驗显示組间差异。

　　實驗結果：

　　由表中數據可以看出，超聲激活血卟啉處理1h后，UH組、U組平均光密度值明显低于CT組、H組，且UH組平均光密度值低于U組，经組间t檢驗，UH組与其它組差异极显著(p<0.01)；超聲激活血卟啉處理3h后，UH組平均光密度值小幅度下降，CT組、H組基本无变化，U組平均光密度下降，经組间t檢驗，UH組与可組差异显著(P<0.05)；UH組与CT組、H組差异极显著(p<0.01)；超聲激活血卟啉處理5h后，UH組平均光密度值下降，其它組基本无变化，UH組与其它組差异极显著(p<0.01)(表1)。由图可知，UH組、U組平均光密度值明显低于H組和CT組，随时间延长U組、UH組变化显著。

　　表1EGFR在超声處理1h、3h、5h后平均光密度值比较(*10^-2)

　　圖1EGFR在超声處理1h、3h、5h后平均光密度值比较(*10^-2)

　　安泰ATA-8202射頻功率放大器：

　　本文實驗素材由西安安泰電子整理發布。西安安泰電子是專業從事功率放大器、高压放大器、功率信號源、前置微小信號放大器、高精度電壓源、高精度電流源等電子測量儀器研發、生産和銷售的高科技企業。Aigtek已经成为在业界拥有广泛产品线，且具有相当规模的仪器设备供应商，样机都支持免費試用。如想了解更多功率放大器等产品，请持续关注安泰电子官网www.aigtek.com或拨打029-88865020。